ephrin-B2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400777-ACT

EFNB2 codifica a efrina-B2, um ligante ancorado à membrana para as tirosina-quinases receptoras EphB, que medeia sinalização bidirecional célula–célula. As interações efrina-B2/EphB regulam o brotamento angiogênico, a especificação artério-venosa, a remodelação vascular e pistas de orientação durante o desenvolvimento, coordenando a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e a migração celular. A sinalização interage com vias que controlam a remodelação de actina e a organização das junções, incluindo GTPases da família Rho e redes de fosforilação a jusante que moldam o comportamento endotelial e perivascular. A atividade desregulada de EFNB2 tem sido associada a alterações no padrão vascular e à angiogênese associada a tumores, apoiando seu uso em estudos mecanísticos de biologia vascular e de sinalização do microambiente.

ephrin-B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFNB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ephrin-B2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFNB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFNB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ephrin-B2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFNB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ephrin-B2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ephrin-B2 em células tumorais com expressão de EFNB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.