ephrin-B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400873-ACT

EFNB1 codifica a ephrin-B1, um ligante ancorado à membrana para as tirosina-quinases receptoras Eph, que medeia sinalização dependente de contato para coordenar a adesão celular, a formação de fronteiras e a migração direcionada. A ephrin-B1 participa de sinalização bidirecional Eph/ephrin, que se cruza com a remodelação do citoesqueleto e com vias de GTPases da família Rho, influenciando o padrão de organização dos tecidos, a arquitetura epitelial e a orientação axonal. A desregulação da sinalização de EFNB1 tem sido associada a anomalias do desenvolvimento e a programas alterados de comunicação célula–célula relevantes para invasão e metástase no câncer. Como um sinal de superfície que integra informação posicional, a ephrin-B1 é amplamente estudada em morfogênese, neurobiologia e interações tumor–estroma.

ephrin-B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ephrin-B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ephrin-B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ephrin-B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ephrin-B1 em células tumorais com expressão de EFNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.