Plásmido Doble Nickase (h) ephrin-A5: sc-402127-NIC

EFNA5 codifica la efrina-A5, un ligando anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) para las tirosina quinasas receptoras EphA, que media una señalización dependiente del contacto para coordinar el posicionamiento celular, la formación de límites y la guía axonal. Las interacciones efrina-A5–Eph regulan la remodelación del citoesqueleto y la dinámica adhesiva mediante vías que involucran GTPasas de la familia Rho, señalización de adhesiones focales e internalización del complejo receptor–ligando dependiente de endocitosis. En tejidos humanos, la efrina-A5 contribuye al ensamblaje de circuitos neuronales y puede influir en la migración celular y en programas de patrón tisular que con frecuencia se reconfiguran en la enfermedad. La señalización alterada EFNA5/EphA se ha investigado en contextos como fenotipos del neurodesarrollo y comportamientos de crecimiento desregulado o relacionados con la invasión en modelos de cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de vías.

ephrin-A5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EFNA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EFNA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EFNA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EFNA5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.