ephrin-A2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403672-LAC

EFNA2 codifica a efrina‑A2, um ligante de membrana ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) para as tirosina‑quinases receptoras EphA, que medeia sinalização dependente de contacto entre células adjacentes. As interações efrina‑A2–EphA regulam a orientação axonal, o mapeamento topográfico e a formação de fronteiras, e também coordenam a adesão, a repulsão e a migração celulares por meio de GTPases da família Rho e de vias de remodelação do citoesqueleto. Em contextos não neuronais, a efrina‑A2 contribui para o padrão angiogénico e para a organização tecidular ao modular o agrupamento de recetores, a endocitose e os efeitos de sinalização a jusante associados às vias MAPK/ERK e PI3K. Redes de sinalização Eph/efrina desreguladas, incluindo sinais dependentes de EFNA2, são frequentemente investigadas em modelos de motilidade celular aberrante, comportamento invasivo e interações microambientais alteradas em cancro e biologia vascular.

As Partículas de Ativação Lentivirais ephrin-A2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de EFNA2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ephrin-A2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição EFNA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ephrin-A2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo EFNA2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.