ephrin-A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401309-ACT

EFNA1 codifica a efirina-A1, um ligante de superfície celular ancorado por GPI para as tirosina-quinases receptoras EphA, que medeia sinalização dependente de contato para regular o posicionamento celular, a formação de limites e o padrão tecidual. As interações efirina-A1/EphA coordenam sinalização bidirecional que influencia as GTPases da família Rho, a dinâmica do citoesqueleto, a renovação das adesões e a migração, com efeitos a jusante sobre a atividade das vias MAPK e PI3K/AKT, dependendo do contexto celular. Em células humanas, EFNA1 está implicado no remodelamento angiogênico, na organização epitelial e na comunicação cruzada com o microambiente inflamatório. A sinalização desregulada de efirina-A1 tem sido associada a alterações no comportamento vascular e a fenótipos invasivos na biologia do câncer, tornando-a um nó útil para estudar redes de sinalização receptor–ligante e a motilidade celular dependente do microambiente.

ephrin-A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFNA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ephrin-A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFNA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFNA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ephrin-A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFNA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ephrin-A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ephrin-A1 em células tumorais com expressão de EFNA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.