EphB6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420202
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EphB6 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EphB6, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EphB6 Anticorpo (D-7): sc-398795
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EphB6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420202 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ephb6 codifica o EphB6, um membro da família de receptores tirosina-quinase Eph que participa na sinalização dependente de contacto com ligandos ephrin-B, regulando a comunicação célula–célula. Embora o EphB6 tenha atividade quinase reduzida em comparação com outros recetores EphB, ele modula o agrupamento (clustering) de recetores e vias a jusante que controlam a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e a migração direcional, com ligações à sinalização de GTPases da família Rho e ao crosstalk entre as redes MAPK/PI3K. Em sistemas murinos, o EphB6 é estudado em processos como a ativação de células imunitárias e a organização tecidular, nos quais gradientes de ephrin–Eph moldam o posicionamento celular. A desregulação da sinalização associada ao EphB6 tem sido investigada em contextos de alterações do comportamento epitelial e de fenótipos relacionados com tumores, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico em estudos de controlo do crescimento e de interações com o microambiente.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EphB6 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ephb6 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ephb6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ephb6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EphB6.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ephb6 para a investigação da sinalização de EphB6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ephb6 críticos para a função EphB6
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ephb6 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EphB6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EphB6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ephb6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EphB6 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EphB6 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ephb6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ephb6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.