Plásmido CRISPR de Activación (h) EP3: sc-402485-ACT

PTGER3 codifica el receptor humano de prostaglandina E2 EP3, un GPCR que se acopla predominantemente a Gi para suprimir la adenilato ciclasa y reducir el cAMP, con un acoplamiento dependiente del contexto a otras proteínas G que pueden modular la señalización MAPK y el Ca2+ intracelular. EP3 participa en el control mediado por prostaglandinas de la inflamación, el tono vascular, la función plaquetaria, la contractilidad del músculo liso y la señalización neuronal, integrando señales de mediadores lipídicos en programas transcripcionales y metabólicos específicos de cada tipo celular. A través de estas vías, la señalización de EP3 es relevante en modelos de regulación inflamatoria, biología cardiovascular y trombótica, y neurofisiología, y se investiga con frecuencia en contextos en los que el equilibrio de los receptores de prostanoides influye en las respuestas tisulares.

EP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGER3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGER3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGER3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGER3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EP3 en células tumorales con expresión de PTGER3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.