EP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401464-ACT

PTGER2 codifica o receptor humano de prostaglandina E2 (EP2), um receptor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente via Gs para elevar o cAMP intracelular e ativar programas transcricionais dependentes de PKA/CREB. O EP2 integra sinais de prostaglandina E2 em vias que controlam inflamação, tônus vascular, função de barreira epitelial e remodelamento tecidual, com comunicação cruzada a jusante com a sinalização de MAPK e PI3K de maneira dependente do tipo celular. A sinalização desregulada de PTGER2/EP2 tem sido associada a alterações na ativação de células imunes e na produção de citocinas, e é frequentemente estudada no contexto da biologia da inflamação crônica, de processos associados à fibrose e da sinalização no microambiente tumoral.

EP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGER2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGER2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGER2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGER2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EP2 em células tumorais com expressão de PTGER2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.