envoplakin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420248
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- envoplakin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico envoplakin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:envoplakin Anticorpo (F-4): sc-137033
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
envoplakin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420248 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Evpl de camundongo codifica a envoplaquina, um citoancorador (cytolinker) da família das plaquinas que participa da montagem e estabilização do envelope córneo em epitélios estratificados. A envoplaquina atua como uma plataforma de interações proteína–proteína que conectam filamentos intermediários, componentes das junções desmossômicas e complexos associados à membrana, sustentando a integridade da barreira epidérmica e mucosa durante a diferenciação. Por seu papel na organização do citoesqueleto e na maturação das junções, EVPL é comumente utilizado para investigar a homeostase epitelial, respostas a feridas e processos de remodelamento induzidos por estresse. Alterações na expressão ou na organização de proteínas do envelope córneo, incluindo a envoplaquina, têm sido associadas à disfunção de barreira e a fenótipos inflamatórios cutâneos, tornando EVPL relevante para estudos mecanísticos da biologia de doenças epiteliais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO envoplakin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Evpl em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Evpl, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Evpl na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína envoplakin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Evpl para a investigação da sinalização de envoplakin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Evpl críticos para a função envoplakin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Evpl para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo envoplakin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo envoplakin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Evpl. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo envoplakin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR envoplakin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Evpl para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Evpl definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.