Plasmide Double Nickase (h) Endothelin-2/EDN2/ET-2: sc-403871-NIC

EDN2 code l’endothéline‑2 (ET‑2), un peptide vasoactif sécrété de la famille des endothélines, qui transmet ses signaux principalement via les récepteurs de l’endothéline ETA (EDNRA) et ETB (EDNRB) afin de réguler la contraction du muscle lisse, le tonus vasculaire et la communication paracrine. ET‑2 active une signalisation couplée aux protéines G qui module les flux de calcium intracellulaire, les cascades PKC/MAPK et des programmes transcriptionnels en aval influençant la prolifération, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire. L’expression d’EDN2 est étroitement régulée dans les tissus reproducteurs et lors de l’hypoxie et de l’inflammation, ce qui la relie à des processus tels que la rupture folliculaire associée à l’ovulation, les réponses angiogéniques et le recrutement de cellules immunitaires. Une signalisation de l’endothéline dérégulée a été impliquée dans le remodelage cardiovasculaire, des phénotypes fibrosants et des modifications du microenvironnement tumoral, faisant d’EDN2 un nœud utile pour des études mécanistiques des voies dépendantes des GPCR.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EDN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EDN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EDN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EDN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.