Emt Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402628-NIC

A ITK humana (quinase de células T induzível por IL-2) codifica uma tirosina quinase não receptora da família Tec que propaga a sinalização a jusante do receptor de células T, de receptores coestimuladores e de sinais de quimiocinas, moldando a ativação, a diferenciação e a produção de citocinas das células T. A ITK integra eventos proximais de fosforilação com a ativação de PLCγ1, o fluxo de cálcio, a sinalização por MAPK e programas transcricionais dependentes de NFAT/NF-κB/AP-1, influenciando a formação da sinapse imune e a remodelação do citoesqueleto. A desregulação da sinalização de ITK tem sido associada a polarização Th2/Th17 alterada, imunidade antiviral prejudicada e estados aberrantes de ativação linfocitária relevantes para a biologia de imunodeficiências e doenças linfoproliferativas. Como um nó de via que conecta o reconhecimento de antígeno a saídas transcricionais, a ITK é frequentemente estudada em redes de sinalização imune, decisões de linhagem de células T e crosstalk de sinalização inflamatória.

Emt O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITK em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITK. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITK. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITK interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.