ELOVL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404998-ACT

ELOVL2 codifica uma elongase de ácidos graxos localizada no retículo endoplasmático, que catalisa etapas de elongação limitantes da velocidade na síntese de ácidos graxos poli-insaturados de cadeia muito longa, incluindo precursores do ácido docosa-hexaenoico (DHA). Ao alongar substratos C20–C22 para produtos de cadeia mais longa, a ELOVL2 influencia a composição lipídica das membranas, a disponibilidade de mediadores lipídicos e a bioenergética celular por meio de vias interconectadas de metabolismo de ácidos graxos e remodelamento de fosfolipídios. Alterações na expressão ou na atividade de ELOVL2 têm sido associadas a mudanças na homeostase lipídica da retina e do sistema nervoso, na sinalização inflamatória e na regulação epigenética relacionada ao envelhecimento. Essas propriedades tornam a ELOVL2 um alvo útil para estudar o controle metabólico da dinâmica de membrana e a sinalização dependente de lipídios em células humanas.

ELOVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELOVL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ELOVL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELOVL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELOVL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ELOVL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELOVL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ELOVL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ELOVL2 em células tumorais com expressão de ELOVL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.