elastin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400640-ACT

O gene humano **ELN** codifica a elastina, uma proteína da matriz extracelular altamente reticulada que confere elasticidade e capacidade de recuo a tecidos como as paredes arteriais, o pulmão e a pele. A elastina é depositada na forma de tropoelastina e montada sobre arcabouços microfibrilares, acoplando a organização da matriz ao comportamento das células musculares lisas, à mecanotransdução e às vias de remodelamento da matriz extracelular. A expressão de **ELN** e a integridade das fibras de elastina influenciam a complacência vascular e a homeostase do tecido conjuntivo, ligando alterações na elastogênese a doenças hereditárias e adquiridas caracterizadas por estenose arterial, suscetibilidade a aneurismas e flacidez dérmica. Como componente de matriz com meia-vida longa, a elastina é frequentemente estudada em modelos de desenvolvimento, envelhecimento e alterações biomecânicas teciduais associadas à fibrose.

elastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

elastin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de elastin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de elastin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via elastin em células tumorais com expressão de ELN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.