Elastase-3A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403529-ACT

CELA3A codifica a elastase-3A, uma serino protease secretada do tipo quimotripsina, produzida principalmente por células acinares pancreáticas e liberada no duodeno como uma enzima digestiva envolvida na proteólise de proteínas da dieta. Como parte da rede enzimática do pâncreas exócrino, a elastase-3A contribui para a síntese regulada de zimogênios, a secreção e as cascatas de ativação luminal que sustentam o processamento de nutrientes e a homeostase gastrointestinal. A expressão alterada de serino proteases pancreáticas, incluindo membros da família das elastases, é frequentemente avaliada em estudos sobre respostas ao estresse de células acinares, sinalização inflamatória e remodelamento do tecido pancreático. Assim, CELA3A é relevante para pesquisas mecanísticas sobre a biologia do pâncreas exócrino e mudanças associadas a doenças nos programas de enzimas digestivas.

Elastase-3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CELA3A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Elastase-3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CELA3A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CELA3A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Elastase-3A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CELA3A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Elastase-3A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Elastase-3A em células tumorais com expressão de CELA3A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.