elafin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401832-ACT

PI3 codifica a elafina, um inibidor secretado de proteases de serina (também conhecido como inibidor de peptidase 3) que restringe a elastase de neutrófilos e proteases relacionadas para preservar a integridade da barreira epitelial durante a inflamação. A elafina participa da imunidade inata das mucosas e da remodelação tecidual ao limitar a degradação da matriz extracelular mediada por proteases e ao modular microambientes ricos em citocinas. Sua expressão é regulada de forma dinâmica em resposta a sinais inflamatórios nos epitélios das vias aéreas, da pele e do trato gastrointestinal, associando o PI3 a processos como reparo de feridas e defesa do hospedeiro. Níveis desregulados de PI3/elafina têm sido associados a condições inflamatórias crônicas e ao desequilíbrio protease–antiprotease observado em múltiplos contextos de doenças epiteliais, sustentando seu uso como marcador mecanístico em pesquisas de imunologia e biologia de barreiras.

elafin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PI3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

elafin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PI3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PI3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de elafin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PI3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de elafin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via elafin em células tumorais com expressão de PI3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.