eIF4E2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403245-ACT

EIF4E2 codifica a eIF4E2 (também conhecida como 4EHP), um fator de iniciação da tradução que se liga ao cap e modula a síntese de proteínas seletiva para mRNAs ao competir com a eIF4E e ao associar-se a repressores para controlar a tradução dependente de cap. A eIF4E2 contribui para a regulação pós-transcricional durante respostas ao estresse, diferenciação e hipóxia, influenciando a estabilidade de mRNAs e o output translacional em vias ligadas ao sensoriamento de oxigênio e à adaptação celular. Por meio de interações com proteínas ligadoras de RNA e complexos associados a microRNAs, ela molda programas de expressão gênica que afetam o controle do ciclo celular, o metabolismo e a sobrevivência. A desregulação do controle translacional mediado por eIF4E2 tem sido implicada em contextos relevantes para a biologia do câncer e outras doenças nas quais a síntese proteica aberrante e a sinalização de estresse são proeminentes.

eIF4E2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF4E2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF4E2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF4E2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF4E2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF4E2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF4E2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF4E2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF4E2 em células tumorais com expressão de EIF4E2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.