eIF4B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402494-ACT

O gene humano EIF4B codifica a eIF4B, um fator de iniciação da tradução que potencializa a atividade de helicase de RNA da eIF4A e promove o recrutamento do complexo de pré-iniciação 43S para mRNAs estruturados, aumentando assim a eficiência da tradução dependente de cap. A eIF4B é regulada por sinais de fatores de crescimento e nutrientes, incluindo as vias PI3K–AKT–mTOR e MAPK, por meio de eventos de fosforilação que ajustam o carregamento de ribossomos e as taxas de síntese proteica. Ao influenciar a tradução de transcritos envolvidos em proliferação, respostas ao estresse e sobrevivência, o EIF4B contribui para programas celulares como a progressão do ciclo celular e o controle translacional adaptativo. A atividade e a fosforilação desreguladas da eIF4B têm sido associadas a alterações no output translacional na biologia do câncer e em outras doenças em que o controle da síntese proteica está perturbado.

eIF4B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF4B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF4B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF4B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF4B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF4B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF4B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF4B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF4B em células tumorais com expressão de EIF4B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.