eIF3α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404354-ACT

EIF3J codifica uma subunidade do complexo do fator eucariótico de iniciação da tradução 3 (eIF3), um regulador central da iniciação da tradução dependente de cap, que coordena o recrutamento da subunidade ribossomal 40S e a seleção do códon de início. Por meio do seu papel na montagem de complexos de iniciação e na modulação da tradução específica de mRNAs, o EIF3J influencia a proteostase, o crescimento celular e o controle translacional adaptativo ao estresse. A desregulação de subunidades do eIF3 tem sido associada a programas de tradução alterados que sustentam a sinalização oncogênica, a progressão do ciclo celular e vias de sobrevivência, tornando o EIF3J um ponto de partida útil para estudar mecanismos centrados na tradução em contextos relevantes para doenças. Investigar a função do EIF3J pode esclarecer como a tradução seletiva impacta a proliferação, a apoptose e as respostas ao estresse nutricional e do retículo endoplasmático.

eIF3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF3J sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF3J em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF3J, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF3α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF3J nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF3α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF3α em células tumorais com expressão de EIF3J silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.