eIF2C Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400813-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eIF2CO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eIF2C (h) e o Plasmídeo Double Nickase eIF2C (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AGO2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:eIF2C Anticorpo (B-3): sc-376696
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eIF2C Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400813-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2C Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400813-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O AGO2 humano (eIF2C2) codifica a Argonaute 2, o núcleo catalítico do complexo de silenciamento induzido por RNA (RISC), que se liga a pequenos RNAs e direciona a regulação pós-transcricional específica de sequência da expressão gênica. O AGO2 medeia a atividade endonucleolítica “slicer” para alvos selecionados de siRNA e miRNA, contribuindo para a clivagem de mRNA, a repressão da tradução e a degradação de mRNA. Por meio dessas funções, ele modula vias que controlam proliferação, diferenciação, respostas antivirais inatas e programas adaptativos ao estresse. A expressão desregulada de AGO2 ou a atividade do RISC tem sido associada a redes de miRNA alteradas observadas em múltiplos cânceres e distúrbios neurológicos, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar o silenciamento por RNA e os circuitos de regulação gênica.
eIF2C O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AGO2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AGO2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AGO2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AGO2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.