EHZF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404324-ACT

ZNF521 codifica a proteína humana de dedo de zinco EHZF, um regulador transcricional nuclear que modula programas de expressão gênica ligados ao controle do destino celular, à proliferação e ao comprometimento de linhagem. Por meio de seus domínios de dedos de zinco de ligação ao DNA e de interações com complexos corre- regulatórios, a EHZF influencia redes transcricionais dependentes de cromatina importantes em contextos hematopoéticos e neurais. A expressão desregulada de ZNF521 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e a sinalização de crescimento aberrante observados em diversos modelos relacionados ao câncer, o que a torna relevante para estudos de circuitos transcricionais oncogênicos. Como um nó em vias transcricionais e epigenéticas mais amplas, a EHZF é frequentemente investigada quanto ao seu impacto em fenótipos semelhantes aos de células-tronco, programas gênicos do desenvolvimento e feedback regulatório dependente do contexto.

EHZF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF521 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EHZF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF521 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF521, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EHZF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF521 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EHZF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EHZF em células tumorais com expressão de ZNF521 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.