Plásmido CRISPR de Activación (h) EHZF: sc-404324-ACT

ZNF521 codifica la proteína humana de dedos de zinc EHZF, un regulador transcripcional nuclear que modula programas de expresión génica vinculados al control del destino celular, la proliferación y el compromiso de linaje. A través de sus dominios de dedos de zinc de unión al ADN y de sus interacciones con complejos correguladores, EHZF influye en redes transcripcionales dependientes de la cromatina que son importantes en contextos hematopoyéticos y neuronales. La expresión desregulada de ZNF521 se ha asociado con estados de diferenciación alterados y señalización de crecimiento aberrante observados en varios modelos relacionados con el cáncer, lo que la hace relevante para estudios de circuitería transcripcional oncogénica. Como nodo dentro de vías transcripcionales y epigenéticas más amplias, EHZF se analiza con frecuencia por su impacto en fenotipos similares a los de células madre, programas génicos del desarrollo y retroalimentación reguladora dependiente del contexto.

EHZF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF521 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EHZF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF521 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF521, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EHZF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF521 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EHZF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EHZF en células tumorales con expresión de ZNF521 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.