Partículas Lentivirales de Activación (r) EGR1: sc-437290-LAC

EGR1 (respuesta temprana al crecimiento 1) es un factor de transcripción de respuesta inmediata que se induce rápidamente por señales mitogénicas y de estrés, y actúa como un regulador central de programas de expresión génica dependientes de estímulos en células de rata. Integra señales aguas arriba procedentes de las vías MAPK/ERK, PKC, señalización por calcio y factores de crecimiento para controlar la transcripción vinculada a la progresión del ciclo celular, la diferenciación, la apoptosis y la plasticidad sináptica. EGR1 modula redes downstream implicadas en la remodelación de la matriz extracelular, la señalización de citocinas y quimiocinas, y la actividad vascular y neuronal, lo que lo hace ampliamente relevante para modelos de inflamación, fibrosis y neuroadaptación. La actividad desregulada de EGR1 se ha asociado con fenotipos alterados de proliferación y respuesta al estrés en diversos contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para el análisis de vías.

Las partículas de activación lentiviral EGR1 (r) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EGR1 (r) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de EGR1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.