EGR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400133-ACT

EGR1 (early growth response 1) é um fator de transcrição do tipo “immediate-early”, com domínios dedo de zinco, rapidamente induzido por mitógenos, sinais de estresse e atividade neuronal. Ele integra sinais das vias MAPK/ERK e de outras vias responsivas a estímulos para regular genes que controlam proliferação, diferenciação, apoptose, inflamação e remodelamento da matriz extracelular. EGR1 influencia decisões de destino celular em múltiplos tecidos ao coordenar programas transcricionais a jusante de receptores de fatores de crescimento e da sinalização por citocinas. A atividade desregulada de EGR1 tem sido implicada tanto em contextos oncogênicos quanto de supressão tumoral, dependendo do estado celular, e também está associada ao remodelamento cardiovascular, à fibrose e a processos ligados à neuroplasticidade.

EGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EGR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EGR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EGR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EGR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGR1 em células tumorais com expressão de EGR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.