Egr-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403343-ACT

EGR4 codifica a Egr-4, um fator de transcrição de resposta imediata do tipo dedo de zinco que conecta sinais extracelulares a mudanças rápidas em programas de expressão gênica. Ele é induzido a jusante de MAPK/ERK e de outras cascatas de sinalização dependentes de atividade, nas quais modula redes transcricionais envolvidas em decisões de destino celular, diferenciação e respostas a estresse específicas do contexto. A Egr-4 participa de circuitos regulatórios que controlam a biologia do sistema nervoso e do sistema reprodutivo, e padrões de expressão alterados têm sido relatados em estudos de biologia tumoral e de processos do neurodesenvolvimento. Como regulador transcricional, EGR4 serve como um nó útil para investigar redes gênicas responsivas a estímulos e o redirecionamento de vias a jusante.

Egr-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EGR4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Egr-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EGR4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EGR4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Egr-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EGR4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Egr-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Egr-4 em células tumorais com expressão de EGR4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.