EGFR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420131-ACT

O gene murino **Egfr** codifica o receptor do fator de crescimento epidérmico (**EGFR**), uma tirosina-quinase receptora que coordena a proliferação, a sobrevivência, a migração e a diferenciação celulares em resposta a ligantes da família EGF. A dimerização induzida por ligante e a autofosforilação propagam a sinalização pelas vias canônicas **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT–mTOR**, **JAK/STAT** e **PLCγ/PKC**, integrando sinais que moldam programas de desenvolvimento e a homeostase tecidual. A atividade do EGFR é rigidamente regulada por endocitose, renovação mediada por ubiquitina e fosforilação por feedback, e alterações na sinalização do EGFR são comumente usadas como modelo mecanístico de controle de crescimento aberrante. Em camundongos, o **Egfr** é amplamente estudado na biologia epitelial, no reparo de feridas e no crosstalk imune–estromal, e a desregulação da via embasa pesquisas sobre sinalização oncogênica, remodelamento associado à inflamação e redes de sinalização adaptativas ligadas à resistência.

EGFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Egfr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Egfr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Egfr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGFR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Egfr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGFR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGFR em células tumorais com expressão de Egfr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.