EGFL7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-436135-ACT

Egfl7 codifica o domínio 7 semelhante ao fator de crescimento epidérmico (EGFL7), uma proteína secretada associada à matriz extracelular, enriquecida em células endoteliais, que dá suporte ao desenvolvimento vascular e ao remodelamento angiogênico. O EGFL7 participa da migração endotelial, da formação de tubos e da estabilização dos vasos, e tem sido associado à modulação da sinalização célula–célula e célula–matriz, incluindo efeitos sobre a atividade da via Notch durante a angiogênese por brotamento. Em modelos murinos, a alteração da expressão de Egfl7 perturba o padrão de vascularização e o comportamento endotelial, implicando esse gene em vias relevantes para respostas a lesão isquêmica e para a neovascularização associada a tumores. A desregulação de EGFL7 também tem sido estudada no contexto de microambientes inflamatórios e de remodelamento tecidual, nos quais a disfunção endotelial contribui para os fenótipos de doença.

EGFL7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Egfl7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGFL7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Egfl7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Egfl7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGFL7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Egfl7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGFL7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGFL7 em células tumorais com expressão de Egfl7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.