EGFL6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411850-ACT

EGFL6 (proteína 6 semelhante ao fator de crescimento epidérmico) é uma proteína secretada associada à matriz extracelular, enriquecida em compartimentos vasculares e estromais, onde sustenta interações célula–matriz e a comunicação no microambiente tecidual. Por meio de suas repetições do tipo EGF, a EGFL6 influencia comportamentos de células endoteliais e mesenquimais ligados à adesão, migração e remodelamento angiogênico — processos que se cruzam com a sinalização por integrinas e vias responsivas a fatores de crescimento. Alterações na expressão de EGFL6 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e em outros distúrbios caracterizados por neovascularização aberrante e reprogramação da matriz extracelular, tornando-a um marcador útil e um nó funcional para estudar fenótipos conduzidos pelo microambiente. A pesquisa sobre EGFL6 humana comumente se concentra em como sinais extracelulares remodelam programas transcricionais que controlam invasão, padronização vascular e organização tecidual.

EGFL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EGFL6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGFL6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EGFL6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EGFL6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGFL6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EGFL6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGFL6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGFL6 em células tumorais com expressão de EGFL6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.