EGFL11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406815

Visão geral

EYS codifica a EGFL11, uma grande proteína associada à matriz extracelular, enriquecida em células fotorreceptoras, onde contribui para a integridade estrutural e a manutenção do segmento externo da retina. A EGFL11 contém múltiplos domínios do tipo EGF, compatíveis com funções em interações proteína–proteína, na formação de arcabouços extracelulares e na organização do ambiente periciliar que sustenta o tráfego ciliar e a homeostase da fototransdução. A disfunção de EYS está fortemente associada à degeneração retiniana hereditária, incluindo retinite pigmentosa autossômica recessiva e fenótipos relacionados caracterizados por disfunção progressiva dos fotorreceptores. Como resultado, EYS/EGFL11 é frequentemente estudado em vias que regulam o transporte associado aos cílios, a organização da matriz extracelular e as respostas ao estresse em células da retina.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EGFL11 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EYS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EYS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EYS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EGFL11.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EYS para a investigação da sinalização de EGFL11, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EYS críticos para a função EGFL11
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EYS para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EGFL11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EGFL11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EYS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EGFL11 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EGFL11 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EYS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EYS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.