Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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EFP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402678
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EFP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EFP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EFP Anticorpo (E-4): sc-166926
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EFP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402678 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
TRIM25 codifica a ligase E3 de ubiquitina EFP, uma proteína da família TRIM que catalisa eventos de ubiquitinação que controlam a sinalização imune inata e o metabolismo de RNA. A EFP promove respostas antivirais ao ubiquitinar e ativar o RIG-I, facilitando a sinalização a jusante de interferon tipo I por meio de MAVS, TBK1 e IRF3/7, e pode modular respostas inflamatórias associadas ao NF-κB. Para além da defesa do hospedeiro, TRIM25 participa da regulação pós-transcricional por meio de interações com proteínas de ligação a RNA e influencia programas do ciclo celular e de resposta ao estresse. A atividade desregulada de TRIM25 tem sido associada a alterações no tônus de interferon, suscetibilidade a vírus e papéis dependentes do contexto na biologia tumoral e na sinalização endócrina, tornando-o um nó relevante na pesquisa em inflamação e câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EFP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TRIM25 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TRIM25, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TRIM25 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EFP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TRIM25 para a investigação da sinalização de EFP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TRIM25 críticos para a função EFP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TRIM25 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EFP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EFP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TRIM25. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EFP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EFP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TRIM25 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TRIM25 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.