EF-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401163-ACT

O gene humano **EEF2** codifica o fator de elongação 2 (EF-2), um componente central do ciclo de elongação da tradução que catalisa a translocação do ribossomo ao longo do mRNA de maneira dependente de GTP. A atividade do EF-2 é um determinante-chave da produção do proteoma e é regulada por vias de sinalização de nutrientes e estresse, incluindo o mTOR e o eixo eEF2K, que coordenam a síntese proteica com o estado energético celular. Alterações na expressão de **EEF2** ou na dinâmica de fosforilação do EF-2 podem modificar programas de controle translacional que influenciam a proliferação, a adaptação ao estresse e a remodelação metabólica. Como um nó central na homeostase translacional, **EEF2** é frequentemente estudado em contextos de sinalização oncogênica, neurobiologia e respostas a estresse celular, nos quais a síntese proteica desregulada contribui para fenótipos associados a doenças.

EF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EEF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EF-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EEF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EEF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EF-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EEF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EF-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EF-2 em células tumorais com expressão de EEF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.