Plasmide CRISPR d'Activation (h) EDIL3: sc-404813-ACT

EDIL3 (EGF-like repeats and discoidin I-like domains 3), également connu sous le nom de DEL-1, code une glycoprotéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, qui module l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que le remodelage tissulaire via des interactions dépendantes des intégrines. Dans les cellules humaines, EDIL3 participe à la régulation du comportement endothélial et des signaux extracellulaires qui façonnent les microenvironnements angiogéniques et inflammatoires, influençant la dynamique leucocytes–endothélium et l’organisation de la matrice. Une expression dérégulée d’EDIL3 a été rapportée dans des contextes de remodelage vasculaire et de stroma associé aux tumeurs, soulignant sa pertinence pour les études de l’angiogenèse, de la régulation immunitaire et de la biologie des niches métastatiques. Ces propriétés font d’EDIL3 une cible utile pour disséquer la signalisation de la matrice extracellulaire, les interactions entre voies des intégrines et les phénotypes induits par le microenvironnement.

EDIL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EDIL3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EDIL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EDIL3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EDIL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EDIL3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EDIL3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EDIL3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EDIL3 dans les cellules tumorales présentant une expression de EDIL3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.