EDG-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401366

Visão geral

S1PR3 (EDG-3) codifica um receptor acoplado à proteína G para a esfingosina-1-fosfato que se acopla a Gαi, Gαq e Gα12/13 para regular a mobilização de cálcio, a sinalização MAPK/ERK, a ativação de GTPases da família Rho e a remodelação do citoesqueleto. Por meio dessas vias, o EDG-3 influencia a função de barreira endotelial, o tônus vascular, o tráfego de leucócitos e a migração celular, integrando sinais extracelulares de lípidos com programas de sinalização de adesão e inflamação. Alterações na atividade de S1PR3 têm sido associadas a inflamação desregulada e remodelação vascular e são frequentemente estudadas em contextos como aterosclerose, fibrose e interações tumor–microambiente. Essas características tornam o S1PR3 um alvo útil para dissecar redes de sinalização de esfingolípidos na biologia imune e vascular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EDG-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene S1PR3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do S1PR3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do S1PR3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EDG-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de S1PR3 para a investigação da sinalização de EDG-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) S1PR3 críticos para a função EDG-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos S1PR3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EDG-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EDG-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus S1PR3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EDG-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EDG-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia S1PR3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo S1PR3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.