ECM2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-436571-LAC

O gene Ecm2 de camundongo codifica a proteína 2 da matriz extracelular (ECM2), uma glicoproteína secretada associada à matriz, implicada na organização da matriz extracelular e na modulação das interações célula–matriz. A ECM2 está ligada a processos como adesão celular, migração e remodelamento tecidual, e pode influenciar vias de sinalização que dependem de sinais extracelulares, incluindo redes mediadas por integrinas e responsivas a fatores de crescimento. Alterações na composição da matriz extracelular e na dinâmica de remodelamento estão associadas à fibrose, a microambientes inflamatórios e a interações tumor–estroma, tornando o Ecm2 relevante para estudos mecanísticos de biologia do estroma e de fenótipos regulados pela matriz. Em sistemas de modelos murinos, a ECM2 oferece um ponto de entrada acessível para dissecar como componentes da matriz moldam o comportamento celular em contextos de desenvolvimento e doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais ECM2 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ecm2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ECM2 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ecm2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ECM2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ecm2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.