ECM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420098-ACT

O gene murino **Ecm1** codifica a **proteína 1 da matriz extracelular (ECM1)**, uma glicoproteína matricelular secretada que modula a organização da matriz extracelular e a sinalização célula–matriz. A ECM1 participa de processos como a diferenciação epidérmica, o remodelamento angiogênico e a regulação da estrutura da membrana basal por meio de interações com componentes da matriz e redes de proteases. A expressão alterada de ECM1 tem sido associada à desregulação da arquitetura tecidual, ao remodelamento semelhante à fibrose e a mudanças no comportamento do microambiente tumoral, tornando-a relevante para estudos de inflamação, reparo de feridas e comunicação estroma–epitélio. Em modelos murinos, **Ecm1** é frequentemente investigado por seus papéis na biologia da pele, na homeostase vascular e em vias de sinalização dependentes da matriz extracelular.

ECM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ecm1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ECM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ecm1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ecm1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ECM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ecm1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ECM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ECM1 em células tumorais com expressão de Ecm1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.