EAT-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403780-ACT

SH2D1BはEAT-2をコードしており、EAT-2はSH2ドメインを有するアダプター分子で、主に造血系細胞で発現し、CD244/2B4やCD84を含むSLAMファミリー受容体からのシグナルを下流の免疫エフェクター・プログラムへと結び付けます。EAT-2は、活性化受容体上のリン酸化チロシンモチーフに結合してシグナル伝達複合体を形成することで、リンパ球の活性化閾値、細胞傷害性顆粒応答、ならびにサイトカイン産生を調節し、とりわけNK細胞および一部のT細胞や抗原提示細胞サブセットで重要な役割を果たします。このアダプターは、免疫シナプス形成や炎症性シグナル伝達ネットワークを形作るITSM依存性経路の精密な制御にも寄与します。SH2D1B/EAT-2活性の破綻は、免疫監視の変化や炎症性表現型と関連づけられており、免疫学およびがん生物学における機序解明研究で重要な分子です。

EAT-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SH2D1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EAT-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SH2D1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSH2D1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EAT-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSH2D1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEAT-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSH2D1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEAT-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。