dystrophin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420021-LAC

O gene Dmd do camundongo codifica a distrofina, uma grande proteína do citoesqueleto que liga a F-actina ao complexo distrofina–glicoproteínas no sarcolema, estabilizando as membranas das fibras musculares durante a contração e organizando os costâmeros. A distrofina sustenta a mecanotransdução e a integridade da membrana, influenciando o manejo de cálcio, a sinalização de óxido nítrico e programas de regeneração muscular. A perda ou redução de distrofina desorganiza o complexo de proteínas associadas à distrofina, levando à fragilidade do sarcolema, inflamação e vias de remodelamento que são amplamente usadas para modelar a biologia das distrofias musculares de Duchenne/Becker em sistemas murinos. Assim, o Dmd é central para estudos de homeostase do músculo esquelético e cardíaco, respostas ao estresse e regulação gênica no músculo estriado.

As Partículas de Ativação Lentivirais dystrophin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Dmd numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais dystrophin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Dmd, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de dystrophin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Dmd e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.