Dysbindin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404547-ACT

DTNBP1 codifica a disbindina 1, um componente do complexo 1 de biogênese de organelos relacionados a lisossomos (BLOC-1), que dá suporte ao tráfego endossomal, à biogênese de vesículas e à secreção regulada. Em neurônios, a disbindina 1 contribui para a dinâmica das vesículas sinápticas e para a liberação de neurotransmissores, vinculando-a a vias que controlam a plasticidade sináptica e a triagem intracelular de proteínas. Alterações na expressão ou na função de DTNBP1 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e a processos cognitivos, e defeitos de tráfego relacionados à disbindina são relevantes para estudos de homeostase celular. Assim, este gene é usado como um ponto de entrada mecanístico para investigar o tráfego de membranas, a função sináptica e respostas transcriptômicas a jusante em sistemas modelo humanos.

Dysbindin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DTNBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dysbindin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DTNBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DTNBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dysbindin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DTNBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dysbindin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dysbindin em células tumorais com expressão de DTNBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.