Dyrk2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403999-ACT

DYRK2 codifica a quinase 2 regulada por fosforilação de tirosina de dupla especificidade (Dyrk2), uma quinase de serina/treonina que modula a estabilidade proteica e a progressão do ciclo celular por meio de sinalização dependente de fosforilação. A Dyrk2 tem sido associada à regulação das vias de ubiquitina–proteassoma, incluindo o controle de substratos envolvidos nas respostas a danos no DNA e em programas transcricionais adaptativos ao estresse. Ao influenciar o controle de checkpoints, a sinalização relacionada à apoptose e a proteostase, a atividade de DYRK2 pode moldar fenótipos de proliferação e sobrevivência celular. A expressão ou a sinalização desreguladas de DYRK2 têm sido associadas a alterações no controle de crescimento e em processos de manutenção do genoma relevantes para a biologia do câncer e outros distúrbios proliferativos.

Dyrk2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DYRK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dyrk2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DYRK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DYRK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dyrk2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DYRK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dyrk2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dyrk2 em células tumorais com expressão de DYRK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.