Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401041-ACT

DVL3 codifica a Dishevelled 3 (Dvl-3), uma proteína adaptadora (scaffold) citoplasmática que retransmite sinais de ligantes Wnt para efetores a jusante, coordenando a polaridade celular, a migração e a especificação do destino celular. Por meio de interações com receptores Frizzled e componentes centrais da via Wnt, a Dvl-3 ajuda a equilibrar a transcrição canônica dependente de β-catenina com as saídas de sinalização não canônicas de polaridade celular planar e Wnt/Ca²⁺. A sinalização dependente de DVL3 influencia a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e a orientação do fuso mitótico, conectando-a ao padrão do desenvolvimento e à homeostase tecidual. A atividade Wnt–Dishevelled desregulada, incluindo alterações na expressão de DVL3 ou reconfiguração da via, é frequentemente estudada em contextos como biologia tumoral, invasividade e programas de diferenciação aberrantes.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DVL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DVL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DVL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DVL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 em células tumorais com expressão de DVL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.