Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400785-ACT

O DVL1 humano codifica a Dishevelled 1 (Dvl-1), uma proteína citoplasmática de ancoragem (scaffold) que transduz sinais dos receptores Frizzled/LRP para vias Wnt a jusante. A Dvl-1 coordena a sinalização canônica Wnt/β-catenina por meio da regulação do complexo de destruição da β-catenina e também participa da polaridade celular planar não canônica e da sinalização Wnt/Ca²⁺, que moldam a polaridade, a migração e a organização do citoesqueleto. Por meio dessas vias, o DVL1 influencia decisões de destino celular, o padrão de organização tecidual e fenótipos do tipo-tronco, e a sinalização Wnt–DVL desregulada é comumente implicada em programas transcricionais oncogênicos e em distúrbios do desenvolvimento. Alterações na atividade da via são frequentemente estudadas em contextos como transição epitélio-mesênquima, invasão e diferenciação aberrante.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DVL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DVL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DVL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DVL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 em células tumorais com expressão de DVL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.