DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402745

概要

DUOX1（dual oxidase 1）は、細胞表面で過酸化水素を産生する膜結合型NADPHオキシダーゼをコードしており、粘膜・上皮バリアにおけるレドックスシグナル伝達および宿主防御に寄与します。ペルオキシダーゼ様ドメインとEFハンド型のカルシウム結合モチーフにより、制御されたROS産生が可能となり、自然免疫応答、上皮分化、創傷修復プログラムに影響を与えます。DUOX1由来の酸化種は、MAPKやNF-κB経路などのシグナル伝達の要所を調節し、気道や消化管組織におけるサイトカインおよびケモカイン発現にも影響し得ます。DUOX1活性の制御破綻や酸化的微小環境の変化は、炎症性気道疾患の病態生物学や、エピジェネティックなサイレンシング、酸化ストレス応答の変化といったがん関連の変化と関連づけられています。

DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUOX1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUOX1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUOX1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DUOX1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DUOX1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUOX1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DUOX1の機能に不可欠なDUOX1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUOX1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDUOX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUOX1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DUOX1 HDRプラスミド（h）および DUOX1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUOX1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUOX1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。