Duffy Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406288-ACT

ACKR1 codifica o antígeno Duffy/receptor de quimiocinas, um receptor atípico de quimiocinas expresso de forma proeminente em eritrócitos e em células endoteliais venulares, que se liga a quimiocinas inflamatórias, incluindo CCL2, CXCL8 e ligantes relacionados. Ao atuar como um “sumidouro” e transportador de quimiocinas, o Duffy modula gradientes de quimiocinas, o tráfego de leucócitos e o tônus inflamatório no microambiente vascular. A variação na expressão de ACKR1 é amplamente usada como modelo para estudar a homeostase de quimiocinas, a biologia endotelial e a regulação de antígenos de superfície dos eritrócitos, com relevância para fenótipos associados à inflamação e características hematológicas. Essas funções conectam ACKR1 a redes mais amplas de sinalização imune que governam a migração celular, a sinalização de citocinas/quimiocinas e a inflamação vascular.

Duffy O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACKR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Duffy O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACKR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACKR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Duffy. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACKR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Duffy no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Duffy em células tumorais com expressão de ACKR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.