DSCR 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404157-ACT

PSMG1 (também anotado como DSCR2 em contextos legados) codifica uma chaperona de montagem do proteassoma que auxilia a formação da partícula central 20S, influenciando assim a capacidade do sistema ubiquitina–proteassoma e a homeostase proteica global. Ao regular a biogénese do proteassoma, a PSMG1 afeta vias associadas à progressão do ciclo celular, às respostas ao stress e ao processamento de antigénios por apresentação via MHC de classe I. Alterações na montagem do proteassoma e desequilíbrios na proteostase têm sido associados a fenótipos do neurodesenvolvimento e a perturbações de dosagem cromossómica, incluindo contextos relevantes para a região crítica da síndrome de Down, bem como a mecanismos mais amplos de suscetibilidade ao stress celular. Estas características tornam a PSMG1/DSCR2 um ponto útil para estudar a sinalização dependente da proteostase e a adaptação transcriptómica em células humanas.

DSCR 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DSCR 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DSCR 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DSCR 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DSCR 2 em células tumorais com expressão de PSMG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.