DSC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402944-ACT

O gene humano **DSC1** codifica a desmocolina-1, uma proteína de adesão da família das caderinas dependentes de cálcio, localizada nos desmossomos de epitélios estratificados. A DSC1 sustenta junções intercelulares fortes ao promover interações entre caderinas desmossomais e ao se acoplar a plakoglobina, plakofilinas e desmoplaquina para ancorar filamentos intermediários, contribuindo assim para a integridade da barreira epidérmica e para a mecânica tecidual. Sua expressão está intimamente ligada aos programas de diferenciação de queratinócitos e à morfogênese epitelial, e a regulação alterada de DSC1 é estudada no contexto de adesão célula–célula comprometida, displasia epitelial e biologia tumoral. Como o remodelamento dos desmossomos se conecta à dinâmica do citoesqueleto e à sinalização de estresse, a DSC1 é frequentemente investigada em vias que governam a coesão epitelial, a diferenciação e a migração.

DSC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DSC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DSC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DSC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DSC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DSC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DSC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DSC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DSC1 em células tumorais com expressão de DSC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.