DPF2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404801-ACT

DPF2 (também conhecido como REQU) codifica uma proteína com dedo de zinco que atua como um leitor epigenético em complexos de remodelamento de cromatina dependentes de ATP, incluindo SWI/SNF (BAF/PBAF). Por meio de seus dedos PHD, o DPF2 reconhece modificações nas caudas de histonas e ajuda a coordenar programas de remodelamento de nucleossomos que influenciam o controle transcricional, a especificação de linhagens e a expressão gênica responsiva a estímulos. O DPF2 tem sido associado à regulação da transcrição ligada ao NF-κB e a um controle mais amplo, baseado em cromatina, da proliferação e diferenciação celular. A atividade desregulada da via SWI/SNF e alterações na função de leitores de cromatina envolvendo o DPF2 são temas recorrentes na biologia do câncer e de doenças inflamatórias, o que o torna um ponto útil para estudos mecanísticos de circuitos transcricionais.

DPF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DPF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DPF2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DPF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DPF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DPF2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DPF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DPF2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DPF2 em células tumorais com expressão de DPF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.