DOCK 180 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401387-NIC

DOCK1 codifica a DOCK180, um fator de troca de nucleotídeos de guanina atípico que ativa GTPases da família Rac para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina. Por meio de interações com proteínas adaptadoras como a ELMO, a DOCK180 regula a adesão dependente de integrinas, a formação de lamelipódios, a fagocitose e a migração celular direcionada, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e de vias de quimiocinas. Esse eixo de sinalização sustenta processos como o tráfego de células imunes e a dinâmica epitelial, e a desregulação da sinalização de Rac dependente de DOCK1 tem sido associada a comportamento invasivo e a potencial metastático alterado em múltiplos contextos de câncer. A atividade de DOCK1 também é estudada em cenários inflamatórios e de neurodesenvolvimento, nos quais o controle do citoesqueleto e o movimento celular são centrais para o fenótipo.

DOCK 180 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DOCK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DOCK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DOCK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DOCK1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.