DOCK 180 Plasmide Double Nickase (h): sc-401387-NIC

DOCK1 codifica DOCK180, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) atipico che attiva le GTPasi della famiglia Rac per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina. Attraverso interazioni con proteine adattatrici come ELMO, DOCK180 regola l’adesione integrino-dipendente, la formazione di lamellipodi, la fagocitosi e la migrazione cellulare direzionata, integrando segnali provenienti da recettori tirosin-chinasici e dalle vie delle chemochine. Questo asse di segnalazione supporta processi quali il traffico delle cellule immunitarie e le dinamiche epiteliali, e la deregolazione della segnalazione Rac dipendente da DOCK1 è stata collegata a comportamento invasivo e a un potenziale metastatico alterato in molteplici contesti tumorali. L’attività di DOCK1 è inoltre studiata in ambito infiammatorio e neuroevolutivo, dove il controllo del citoscheletro e il movimento cellulare sono centrali per il fenotipo.

DOCK 180 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DOCK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DOCK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DOCK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DOCK1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.