DND1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404161-ACT

A DND1 humana (dead end protein homolog 1) é uma proteína de ligação a RNA que regula a expressão gênica pós-transcricional ao reconhecer motivos de sequência específicos em mRNAs-alvo e modular sua estabilidade e tradução. É mais conhecida por seus papéis no desenvolvimento de células germinativas e na manutenção da identidade celular, incluindo a coordenação de decisões sobre o destino do RNA que influenciam programas de proliferação, diferenciação e sobrevivência. A DND1 participa de redes que se cruzam com a regulação mediada por microRNAs ao limitar o acesso de microRNAs a transcritos selecionados, moldando assim os resultados proteômicos durante o desenvolvimento. A desregulação do controle de RNA dependente de DND1 tem sido associada a alterações na biologia da linhagem germinativa e a fenótipos relacionados a tumores em sistemas modelo, tornando-a relevante para estudos de reprogramação oncogênica, transições de destino celular e circuitos regulatórios de RNA.

DND1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DND1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DND1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DND1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DND1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DND1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DND1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DND1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DND1 em células tumorais com expressão de DND1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.