DNAM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402189-ACT

CD226 codifica o DNAM-1, um receptor de adesão e coestimulação da superfamília das imunoglobulinas, expresso em células NK, células T CD8+ e em subpopulações de células T CD4+ e de monócitos. O DNAM-1 liga-se aos ligantes CD155 (PVR) e CD112 (NECTIN2) para promover a formação da sinapse imunológica, a polarização dos grânulos citotóxicos e a liberação de citocinas, integrando-se a redes de sinalização que moldam a ativação dos linfócitos e o reconhecimento de células-alvo. Por seu papel em equilibrar sinais ativadores e inibitórios, o CD226 influencia a vigilância imune antitumoral e as respostas à infecção viral. Variações genéticas e expressão desregulada de CD226 têm sido associadas à suscetibilidade a doenças imunomediadas, apoiando seu uso como um ponto de investigação para o estudo de vias inflamatórias e da heterogeneidade funcional de células imunes.

DNAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD226 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DNAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD226 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD226, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DNAM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD226 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DNAM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DNAM-1 em células tumorais com expressão de CD226 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.