DNA pol θ Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-407414-LAC

POLQ codifica a DNA polimerase teta (DNA pol θ), uma polimerase da família A propensa a erros, com um domínio N-terminal semelhante a helicase que coordena a união de extremidades e a síntese limitada de DNA em locais de dano no DNA. A DNA pol θ é um componente central da união de extremidades mediada pela polimerase teta (TMEJ), uma via de reparo dependente de micro-homologia que resolve quebras de dupla fita e promove a estabilidade do genoma quando a recombinação homóloga está comprometida. Por meio de sua atividade na união alternativa de extremidades, POLQ influencia a tolerância ao estresse de replicação, rearranjos cromossômicos e assinaturas mutacionais associadas à instabilidade genômica. A atividade desregulada de POLQ é frequentemente estudada no contexto da reprogramação do reparo de DNA associada ao câncer e de mecanismos de resistência ao estresse genotóxico, tornando-a relevante para a genômica funcional das vias de resposta a danos no DNA.

As Partículas de Ativação Lentivirais DNA pol θ (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de POLQ numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DNA pol θ (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição POLQ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DNA pol θ. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo POLQ e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.