DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-402290-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- DNA pol ε A CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 POLE 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 DNA pol ε A Antibody (D-10): sc-390785
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-402290-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h2) | sc-402290-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
POLE는 DNA 중합효소 ε의 촉매 A 소단위를 암호화하며, 이는 선도 가닥(leading strand) DNA 합성과 S기 진행에 필수적인 고정확도 복제 중합효소입니다. DNA 중합효소 ε는 복제 포크 안정성에 관여하고 CMG 헬리케이스 복합체와 협력하며, 복제 오류를 제한하는 고유의 3′→5′ 엑소뉴클레이스 교정(proofreading) 기능에도 기여합니다. DNA 복제와 유전체 유지에 대한 역할을 통해 POLE는 염색체 무결성을 보호하는 DNA 손상 반응 신호전달 및 복제 스트레스 경로와 연결됩니다. POLE 기능 또는 조절의 이상은 돌연변이 부담 증가와 유전체 불안정성 표현형과 연관되며, 이는 암 관련 복제 결함 및 DNA 복구 의존성을 다루는 연구에서 자주 조사됩니다.
DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 POLE 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
DNA pol ε A CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 POLE 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 POLE 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 DNA pol ε A 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 POLE 위치를 보존하고 내인성 위치에서 DNA pol ε A 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 POLE 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 DNA pol ε A 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.