CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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DNA pol β Double Nickaseプラスミド (h): sc-402861-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DNA pol β Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DNA pol βダブルニカースプラスミド（h）およびDNA pol βダブルニカースプラスミド（h2）は、POLBを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: DNA pol β 抗体 (D-11): sc-376581
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DNA pol β Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402861-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA pol β Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402861-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLBはDNAポリメラーゼβ（DNA pol β）をコードしており、塩基除去修復（BER）経路の主要酵素として、単一ヌクレオチドギャップの充填や、修復合成中に生じる5′-デオキシリボースリン酸（5′-dRP）中間体の処理を担います。DNA pol βはXRCC1、DNAリガーゼIII、DNAグリコシラーゼと協調して働くことで、酸化損傷、アルキル化、自発的な塩基脱落の後にもゲノムの完全性を維持するのに寄与します。POLBの活性や発現の変化は、変異誘発の増加や染色体不安定性と関連づけられており、この経路ががん生物学や加齢に伴うゲノム機能低下に関与するメカニズムと結び付くことを示しています。BERの中核因子として、DNA pol βはDNA損傷シグナル伝達、複製ストレス応答、ならびに遺伝毒性ストレス因子に対する細胞感受性への影響という観点から、頻繁に研究されています。
DNA pol β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における POLB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、POLB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、POLBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、POLBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。